Topmusicanswers
- Jakie problemy mogą wyniknąć z amplifikacji PCR??
- Dlaczego nie ma amplifikacji w PCR??
- Co powoduje amplifikację w PCR??
- Co powoduje niepowodzenie PCR?
Jakie problemy mogą wyniknąć z amplifikacji PCR??
Wiele typowych problemów z PCR i RT-PCR jest identyfikowanych podczas elektroforezy produktów reakcji w żelu agarozowym. Obejmują one brak oczekiwanego produktu amplifikacji, obecność niespecyficznych produktów, nadmierne rozmazywanie i obecność pasma „primer dimer”.
Dlaczego nie ma amplifikacji w PCR??
Enzym polimerazy DNA nie działa
Enzym polimerazy DNA jest odpowiedzialny za wydłużenie związanych starterów wzdłuż matrycowych nici DNA. Jeśli ten enzym nie jest już tak wydajny, być może z powodu zamrażania-rozmrażania, etap wydłużania podczas reakcji PCR będzie niekompletny, co oznacza brak produktu PCR.
Co powoduje amplifikację w PCR?
Podstawowy PCR. Proces PCR został pierwotnie opracowany w celu amplifikacji krótkich segmentów dłuższej cząsteczki DNA (Saiki i in. 1985). Typowa reakcja amplifikacji obejmuje docelowy DNA, termostabilną polimerazę DNA, dwa startery oligonukleotydowe, trifosforany deoksynukleotydów (dNTP), bufor reakcyjny i magnez.
Co powoduje niepowodzenie PCR?
Zwykle pierwszą rzeczą, jaką robią naukowcy, jest obwinianie wadliwego enzymu lub odczynnika, gdy eksperyment się nie powiedzie, ale w przypadku PCR jest to mniej prawdopodobne, że będzie to przyczyną niepowodzenia. Częściej przyczyną są głębsze problemy wewnętrzne, takie jak projektowanie starterów, parametry termocyklera lub niespecyficzne wiązanie z innymi sekwencjami matrycy.
