Topmusicanswers
- Dlaczego nie ma amplifikacji w PCR??
- Dlaczego moje DNA się nie wzmocniło??
- Co się stanie, jeśli startery nie zostaną dodane do PCR??
- Jak naprawić nieswoistą amplifikację w PCR??
Dlaczego nie ma amplifikacji w PCR??
Niewystarczająca amplifikacja może skutkować, jeśli początkowa ilość matrycy jest zbyt niska. Zwiększ liczbę cykli amplifikacji w odstępach co 5 lub, jeśli to możliwe, zwiększ ilość matrycy. Zanieczyszczenia w mieszaninie dNTP mogą prowadzić do niepełnej lub nieprawidłowej amplifikacji lub zahamowania PCR. Używaj wysokiej jakości dNTP.
Dlaczego moje DNA się nie wzmocniło??
1) możesz mieć zły projekt startera lub standaryzację reakcji (więc oceń swój projekt startera i wykonaj, jak już powiedzieli inni, gradientową reakcję PCR w celu oceny różnych temperatur wygrzewania); 2) Brak DNA (twój protokół ekstrakcji mógł się nie powieść), a więc twoje startery mogą się tylko łączyć ze sobą (lub z nimi).
Co się stanie, jeśli startery nie zostaną dodane do PCR??
Pytanie: Jeśli zapomniałeś dodać startery do reakcji PCR, co by się stało i dlaczego?? 1. Twoja reakcja nie powiedzie się, ponieważ polimeraza Taq nie może dodać zasad bez obecności małego fragmentu DNA. ... Twoja reakcja by się nie powiodła, ponieważ nie byłoby enzymu, który mógłby dodać nowe zasady nukleotydowe.
Jak naprawić nieswoistą amplifikację w PCR??
Stosuj mniej cykli, gdy stężenie matrycy jest wysokie i używaj więcej cykli, gdy stężenie matrycy jest niskie. 2. Czas wydłużenia był zbyt długi: zbyt długi czas wydłużenia może pozwolić na niespecyficzną amplifikację. Generalnie używaj czasu przedłużenia 1 min/kb.
