Topmusicanswers
Dostosować temperatury annealingu, ponieważ wysokie stężenia dodatków do PCR lub współrozpuszczalników osłabiają wiązanie startera z celem. Zwiększ ilość polimerazy DNA lub użyj polimeraz DNA o wysokiej procesywności.
...
- Błędy sekwencji na końcach produktów PCR.
- Fałszywie pozytywne wzmocnienie.
- Zasoby.
- Jakie są typowe rozwiązywanie problemów, które mogą wystąpić w PCR??
- Dlaczego mój PCR nie działa??
- Co powoduje rozmazywanie PCR?
- Co się stanie, jeśli temperatura wyżarzania jest zbyt wysoka??
Jakie są typowe rozwiązywanie problemów, które mogą wystąpić w PCR??
Przewodnik rozwiązywania problemów z PCR
| Problem | Powoduje |
|---|---|
| Niska lub brak wydajności produktu PCR | Program termocyklera temperatury wyżarzania i rozciągania nie są optymalne |
| W reakcji brakuje polimerazy Taq lub innego składnika reakcji | |
| Zbyt niskie stężenie podkładu | |
| Sekwencja docelowa nie znajduje się w szablonie DNA |
Dlaczego mój PCR nie działa??
Pominięcie tylko jednego składnika reakcji PCR, czy to polimerazy DNA, starterów, czy nawet matrycowego DNA, spowoduje nieudaną reakcję. Najprostszym rozwiązaniem jest powtórzenie reakcji. ... Jeśli po tym nadal nie ma produktu PCR, prawdopodobnie jest coś innego, co utrudnia twoją reakcję.
Co powoduje rozmazywanie PCR?
Zanieczyszczenie DNA, RNA w próbce DNA, wysokie stężenie DNA w reakcji PCR może powodować rozmazywanie. ... Rozmazywanie DNA zwykle wywoływane w roślinach ze względu na wysokie stężenie matrycowego DNA.
Co się stanie, jeśli temperatura wyżarzania jest zbyt wysoka??
Temperatura wyżarzania była zbyt wysoka
Jeśli temperatura hybrydyzacji jest zbyt wysoka, startery nie są w stanie związać się z matrycą. Zasadą jest stosowanie temperatury wyżarzania o 5°C niższej niż Tm podkładu.
