Za dużo szablonu w pcr

Ilość całkowitego DNA w reakcji PCR ma znaczący wpływ na wynik procedury PCR. Użycie zbyt dużej ilości całkowitego DNA powoduje upakowanie DNA w ograniczonej przestrzeni naczynia reakcyjnego i może prowadzić do fałszywego torowania, a nawet słabej syntezy DNA ze względu na utrudnioną dyfuzję dużych cząsteczek polimerazy Taq.

1. Ile szablonu powinienem dodać do PCR?
2. Czy zbyt dużo startera może hamować PCR??
3. Co może spowodować niepowodzenie reakcji PCR??
4. Ile DNA wystarczy do PCR?

Ile szablonu powinienem dodać do PCR?

Chociaż teoretycznie wystarczyłaby jedna cząsteczka matrycy, w klasycznej reakcji PCR stosuje się zwykle znacznie większe ilości DNA, na przykład do 1 µg genomowego DNA ssaków i zaledwie 1 pg DNA plazmidowego (1).

Czy zbyt dużo startera może hamować PCR??

Zanieczyszczenia w mieszaninie dNTP mogą prowadzić do niepełnej lub nieprawidłowej amplifikacji lub zahamowania PCR. Używaj wysokiej jakości dNTP. Stosowanie nadmiernego stężenia starterów może zwiększyć prawdopodobieństwo, że startery zwiążą się niespecyficznie z niepożądanymi miejscami na matrycy lub ze sobą.

Co może spowodować niepowodzenie reakcji PCR??

Pominięcie tylko jednego składnika reakcji PCR, czy to polimerazy DNA, starterów, czy nawet matrycowego DNA, spowoduje nieudaną reakcję. Najprostszym rozwiązaniem jest powtórzenie reakcji. ... Jeśli po tym nadal nie ma produktu PCR, prawdopodobnie jest coś innego, co utrudnia twoją reakcję.

Ile DNA wystarczy do PCR?

W typowej reakcji 50 µl 1–2 jednostki polimerazy DNA wystarczają do amplifikacji docelowego DNA. Jednak może być konieczne dostosowanie ilości enzymów za pomocą trudnych szablonów. Na przykład, gdy w próbce DNA obecne są inhibitory, zwiększenie ilości polimerazy DNA może poprawić wydajność PCR.